Ang gel electrophoresis ay isa sa mga pangunahing pamamaraan na ginagamit sa molecular biology para sa pagsusuri ng DNA.Ang pamamaraang ito ay nagsasangkot ng paglipat ng mga fragment ng DNA sa pamamagitan ng isang gel, kung saan sila ay pinaghihiwalay batay sa laki o hugis.Gayunpaman, nakatagpo ka na ba ng anumang mga error sa panahon ng iyong mga eksperimento sa electrophoresis, tulad ng mga smeared band sa agarose gel, o walang band sa gel?Ano ang maaaring maging sanhi ng mga pagkakamaling ito?
Ang aming mga technician ay nagbuod ng mga pares ng pag-troubleshoot dito para sa iyong sanggunian.
1. Mga pinahid na banda sa agarose gel
●Nasira ang DNA.Iwasan ang kontaminasyon ng nuclease.
● Ang electrophoresis buffer ay hindi sariwa.Matapos ang paulit-ulit na paggamit ng electrophoresis buffer, bumababa ang lakas ng ionic, at tumataas ang halaga ng pH nito, kaya humina ang kapasidad ng buffer, na nakakaapekto sa epekto ng electrophoresis.Inirerekomenda na palitan ang electrophoresis buffer nang madalas.
● Ginamit ang mga hindi tamang kondisyon ng electrophoresis.Huwag pahintulutan ang boltahe na lumampas sa 20 V/cm, at panatilihin ang temperatura <30° C sa panahon ng electrophoresis.Para sa higanteng DNA strand electrophoresis, ang temperatura ay dapat na <15° C. Suriin na ang electrophoresis buffer ay may sapat na buffer capacity.
● Masyadong maraming DNA ang na-load sa gel.Bawasan ang dami ng DNA.
● Masyadong maraming asin sa DNA.Gumamit ng ethanol precipitation upang alisin ang labis na mga asing-gamot nang maaga.
● Ang DNA ay nahawahan ng protina.Gumamit ng mga phenol extraction upang maalis ang protina nang advanced.
● Na-denatured ang DNA.Huwag magpainit bago ang electrophoresis.Dilute ang DNA sa buffer na may 20 mM NaCl.
2. Anomalya DNA band migration
● Renaturation ng COS site ng λHind III fragment.Painitin ang DNA sa loob ng 5 minuto sa ilalim ng 65° C bago ang electrophoresis, at pagkatapos ay palamig ito sa yunit ng yelo sa loob ng 5 minuto.
● Ginamit ang mga hindi tamang kondisyon ng electrophoresis.Huwag pahintulutan ang boltahe na lumampas sa 20 V/cm, at panatilihin ang temperatura <30° C sa panahon ng electrophoresis.Suriin na ang electrophoresis buffer ay may sapat na buffer capacity.
● Na-denatured ang DNA.Huwag magpainit bago ang electrophoresis.Dilute ang DNA sa buffer na may 20 mM NaCl.
3. Mahina o walang DNA band sa agarose gel
● Walang sapat na dami o konsentrasyon ng DNA na na-load sa gel.Dagdagan ang dami ng DNA.Ang polyacrylamide gel electrophoresis ay bahagyang mas sensitibo kaysa sa agarose electrophoresis, at ang pag-load ng sample ay maaaring bawasan nang naaangkop.
● Nasira ang DNA.Iwasan ang kontaminasyon ng nuclease.
● Ang DNA ay na-electrophorese mula sa gel.Electrophorese ang gel para sa mas kaunting oras, gumamit ng mas mababang boltahe, o gumamit ng mas mataas na porsyento ng gel.
● Hindi wastong W light source ang ginamit para sa visualization ng ethidium bromide-stained DNA.Gumamit ng shortwavelength (254 nm) W na ilaw para sa mas mataas na sensitivity.
4. Nawawala ang mga bandang DNA
●Ang maliit na sukat ng DNA ay na-electrophorese sa gel.Electrophorese ang gel para sa mas kaunting oras, gumamit ng mas mababang boltahe, o gumamit ng mas mataas na porsyento ng gel.
● Mahirap na makilala ang mga banda ng DNA ng magkatulad na molekular.Dagdagan ang oras ng electrophoresis, at suriin ang konsentrasyonng gel upang matiyak na tama ang porsyento ng gel na gagamitin.
● Na-denatured ang DNA.Huwag magpainit bago ang electrophoresis.Dilute ang DNA sa buffer na may 20 mM NaCl.
● Napakalaki ng mga hibla ng DNA, at hindi angkop ang maginoo na gel electrophoresis.Pag-aralan ang pulse gel electrophoresis.Ano ang iba pang mga isyu na mayroon ka sa agarose gel electrophoresis?Magsasaliksik pa kami para sa mga gabay sa hinaharap.
Ang Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) ay isang dalubhasang kumpanya na tumutuon sa mga produktong nauugnay sa electrophoresis sa China.Nagsimula ang kuwento nito noong 1970 nang ang Tsina ay hindi pa pumasok sa reporma at oras ng pagbubukas.Sa pag-unlad ng mga taon, ang Liuyi Bitotech ay may sariling tatak, na kilala bilang Liuyi Brand sa domestic market para sa mga produktong electrophoresis.
Ang tatak ng Liuyi ay may higit sa 50 taong kasaysayan sa China at ang kumpanya ay maaaring magbigay ng matatag at mataas na kalidad na mga produkto sa buong mundo.Sa pamamagitan ng pag-unlad ng mga taon, ito ay karapat-dapat sa iyong pinili!
Ang mga horizontal electrophoresis cells (mga tanke/chambers) ng Liuyi Biotech ay may mataas na kalidad na may magandang hitsura.Sa iba't ibang laki ng mga gel tray, matutugunan nila ang iyong iba't ibang mga pang-eksperimentong kinakailangan.Mayroon kaming sariling teknikal na koponan at pabrika.Mula sa disenyo hanggang sa paggawa, ang mga hilaw na materyales hanggang sa mga pangunahing bahagi, makokontrol natin ang buong proseso.Ang serye ng DYCP 31 ay para sa DNA electrophoresis, na mga modeloDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, atDYCP-31E.Ang mga pagkakaiba sa kanila ay ang mga sukat ng gel at presyo.Nagbibigay kami ng buong laki ng mga produkto para sa aming mga customer.Ang modeloDYCP-32Cmaaaring gumawa ng pinakamalaking gel na 250mm*250mm.
Samantala, inirerekomenda namin ang aming electrophoresis power supplyDYY-6C,DYY-6DatDYY-10Cpara sa aming mga electrophoresis cells (tank/chambers) DYCP-31 at 32 series.
Kung gusto mo ng karagdagang impormasyon tungkol sa mga produkto, mangyaring bisitahin ang website na ito upang makakuha ng higit pa, at malugod na makipag-ugnayan sa amin sa pamamagitan ng email upang ipaalam sa amin kung ano ang gusto mo, at tingnan kung maibibigay namin ang mga solusyon para sa iyo.
Para sa karagdagang impormasyon tungkol sa amin, mangyaring makipag-ugnayan sa amin sa pamamagitan ng email[email protected], [email protected].
Oras ng post: Mayo-09-2022