Ano ang polyacrylamide gel electrophoresis?

Polyacrylamide Gel Electrophoresis

Ang gel electrophoresis ay isang pangunahing pamamaraan sa mga laboratoryo sa buong biological na mga disiplina, na nagpapahintulot sa paghihiwalay ng mga macromolecule tulad ng DNA, RNA at mga protina. Ang iba't ibang media at mekanismo ng paghihiwalay ay nagpapahintulot sa mga subset ng mga molekulang ito na mapaghiwalay nang mas epektibo sa pamamagitan ng pagsasamantala sa kanilang mga pisikal na katangian. Para sa partikular na mga protina, ang polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) ay kadalasang piniling pamamaraan.

Ang PAGE ay isang pamamaraan na naghihiwalay sa mga macromolecule gaya ng mga protina batay sa kanilang electrophoretic mobility, iyon ay, ang kakayahan ng mga analyte na lumipat patungo sa isang electrode ng kabaligtaran na singil. Sa PAGE, ito ay tinutukoy ng singil, laki (molecular weight) at hugis ng molekula. Ang mga analyte ay gumagalaw sa mga pores na nabuo sa polyacrylamide gel. Hindi tulad ng DNA at RNA, ang mga protina ay nag-iiba sa singil ayon sa mga amino acid na pinagsama, na maaaring maka-impluwensya sa kung paano sila tumatakbo. Ang mga string ng amino acid ay maaari ding bumuo ng mga pangalawang istruktura na nakakaapekto sa kanilang nakikitang laki at dahil dito kung paano sila nakakagalaw sa mga pores. Maaaring kung minsan ay kanais-nais na i-denature ang mga protina bago ang electrophoresis upang i-linearize ang mga ito kung kinakailangan ang isang mas tumpak na pagtatantya ng laki.

SDS PAGE

Ang sodium-dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis ay isang pamamaraan na ginagamit upang paghiwalayin ang mga molekula ng protina na may masa na 5 hanggang 250 kDa. Ang mga protina ay pinaghihiwalay lamang batay sa kanilang molekular na timbang. Ang sodium dodecyl sulfate, isang anionic surfactant, ay idinagdag sa paghahanda ng mga gel na nagtatakip sa mga intrinsic na singil ng mga sample ng protina at nagbibigay sa kanila ng katulad na singil sa mass ratio. Sa simpleng salita, binabawasan nito ang mga protina at binibigyan sila ng negatibong singil.

Native PAGE

Ang Native PAGE ay isang pamamaraan na gumagamit ng mga di-denatured na gel para sa paghihiwalay ng mga protina. Hindi tulad ng SDS PAGE, walang denaturing agent ang idinagdag sa paghahanda ng mga gel. Bilang resulta, ang paghihiwalay ng mga protina ay nagaganap sa batayan ng singil at laki ng mga protina. Sa pamamaraang ito, ang conformation, folding at amino acid chain ng mga protina ay ang mga salik na nakasalalay sa paghihiwalay. Ang mga protina ay hindi nasira sa prosesong ito, at maaaring mabawi pagkatapos ng pagkumpleto ng paghihiwalay.

Paano gumagana ang polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE)?

Ang pangunahing prinsipyo ng PAGE ay ang paghiwalayin ang mga analyte sa pamamagitan ng pagpasa sa kanila sa mga pores ng polyacrylamide gel gamit ang isang electric current. Upang makamit ito, ang isang acrylamide-bisacrylamide mix ay polymerized (polyacrylamide) sa pamamagitan ng pagdaragdag ng ammonium persulfate (APS). Ang reaksyon, na na-catalyzed ng tetramethylethylenediamine (TEMED), ay bumubuo ng isang net na tulad ng istraktura na may mga pores kung saan ang mga analyte ay maaaring lumipat (Larawan 2). Kung mas mataas ang porsyento ng kabuuang acrylamide na kasama sa gel, mas maliit ang laki ng butas, kaya mas maliit ang mga protina na madadaanan. Ang ratio ng acrylamide sa bisacrylamide ay makakaapekto rin sa laki ng butas ngunit madalas itong pinananatiling pare-pareho. Ang mga maliliit na butas ng butas ay binabawasan din ang bilis kung saan ang mga maliliit na protina ay nakakagalaw sa gel, na pinapabuti ang kanilang resolution at pinipigilan ang mga ito na mabilis na tumakbo papunta sa buffer kapag inilapat ang kasalukuyang.

Kagamitan para sa Polyacrylamide Gel Electrophoresis

Gel Electrophoresis Cell (Tank/Chamber)
Ang tangke ng gel para sa polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) ay iba sa tangke ng agarose gel. Ang tangke ng agarose gel ay pahalang, habang ang tangke ng PAGE ay patayo. Sa pamamagitan ng vertical electrophoresis cell (tangke/silid), isang manipis na gel (karaniwang 1.0mm o 1.5mm) ay ibinubuhos sa pagitan ng dalawang glass plate at inilagay upang ang ilalim ng gel ay lumubog sa buffer sa isang silid at ang tuktok ay lumubog sa buffer sa ibang silid. Kapag inilapat ang kasalukuyang, ang isang maliit na halaga ng buffer ay lumilipat sa pamamagitan ng gel mula sa itaas na silid patungo sa ilalim na silid. Sa pamamagitan ng malalakas na clamp upang matiyak na ang pagpupulong ay nananatili sa isang patayong posisyon, ang kagamitan ay nagpapadali ng mabilis na pagtakbo ng gel na may pantay na paglamig na nagreresulta sa natatanging mga banda.

Gumagawa ang Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) ng hanay ng mga laki ng polyacrylamide gel electrophoresis cells (mga tangke/chamber). Ang mga modelong DYCZ-20C at DYCZ-20G ay mga patayong electrophoresis cells (mga tangke/chamber) para sa pagsusuri sa pagkakasunud-sunod ng DNA. Ang ilan sa mga vertical electrophoresis cells (mga tangke/chamber) ay tugma sa blotting system, tulad ng modelong DYCZ-24DN, DYCZ-25D at DYCZ-25E ay tugma sa Western Blotting system model na DYCZ-40D, DYCZ-40G at DYCZ-40F, na ginagamit para sa paglilipat ng molekula ng protina mula sa gel patungo sa lamad. Pagkatapos ng electrophoresis ng SDS-PAGE, ang Western Blotting ay isang pamamaraan upang makita ang isang partikular na protina sa isang pinaghalong protina. Maaari mong piliin ang mga blotting system na ito ayon sa mga pang-eksperimentong kinakailangan.

Electrophoresis Power Supply
Upang makapagbigay ng kuryente para sa pagpapatakbo ng gel, kakailanganin mo ng electrophoresis power supply. Sa Liuyi Biotechnology, nagbibigay kami ng hanay ng mga electrophoresis power supply para sa lahat ng aplikasyon. Ang modelong DYY-12 at DYY-12C na may mataas na stable na boltahe at kasalukuyang maaaring matugunan ang mataas na boltahe na kinakailangan electrophoresis. Mayroon itong function ng stand, timing, VH at step-by-step na application. Ang mga ito ay perpekto para sa IEF at DNA sequencing electrophoresis application. Para sa pangkalahatang paggamit ng protina at DNA electrophoresis, mayroon kaming modelong DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, at iba pa, na mga hot sales power supply din na may mga electrophoresis cell (mga tanke/chamber). Ang mga ito ay maaaring gamitin para sa gitna at mababang boltahe na mga aplikasyon ng electrophoresis, tulad ng para sa paggamit ng lab sa paaralan, lab sa ospital at iba pa. Higit pang mga modelo para sa mga power supply, mangyaring bisitahin ang aming website.

Ang tatak ng Liuyi ay may higit sa 50 taong kasaysayan sa China at ang kumpanya ay maaaring magbigay ng matatag at mataas na kalidad na mga produkto sa buong mundo. Sa pamamagitan ng pag-unlad ng mga taon, ito ay karapat-dapat sa iyong pinili!

Para sa karagdagang impormasyon tungkol sa amin, mangyaring makipag-ugnayan sa amin sa pamamagitan ng email[email protected] or [email protected].

Mga sanggunian para sa Ano ang polyacrylamide gel electrophoresis?
1. Karen Steward PhD Polyacrylamide gel electrophoresis, Paano Ito Gumagana, Mga Variant ng Technique, at mga application nito