Nagbahagi kami ng ilang mga pagsasaalang-alang noong nakaraang linggo para sa paggamit ng cellulose acetate membrane electrophoresis, at tatapusin namin ang paksang ito dito ngayon para sa iyong sanggunian.
Pagpili ng Konsentrasyon ng Buffer
Ang konsentrasyon ng buffer na ginagamit sa cellulose acetate membrane electrophoresis ay karaniwang mas mababa kaysa sa ginamit sa papel na electrophoresis. Ang karaniwang ginagamit na pH 8.6BAng arbital buffer ay karaniwang pinipili sa loob ng saklaw na 0.05 mol/L hanggang 0.09 mol/L. Kapag pumipili ng konsentrasyon, ang isang paunang pagpapasiya ay ginawa. Halimbawa, kung ang haba ng strip ng lamad sa pagitan ng mga electrodes sa silid ng electrophoresis ay 8-10cm, ang boltahe ng 25V ay kinakailangan sa bawat sentimetro ng haba ng lamad, at ang kasalukuyang intensity ay dapat na 0.4-0.5 mA bawat sentimetro ng lapad ng lamad. Kung ang mga halagang ito ay hindi nakamit o lumampas sa panahon ng electrophoresis, ang buffer concentration ay dapat na tumaas o diluted.
Ang sobrang mababang konsentrasyon ng buffer ay magreresulta sa mabilis na paggalaw ng mga banda at pagtaas ng lapad ng banda. Sa kabilang banda, ang sobrang mataas na konsentrasyon ng buffer ay magpapabagal sa paglipat ng banda, na nagpapahirap sa pagkilala sa ilang mga separation band.
Dapat pansinin na sa cellulose acetate membrane electrophoresis, ang isang makabuluhang bahagi ng kasalukuyang ay isinasagawa sa pamamagitan ng sample, na bumubuo ng isang malaking halaga ng init. Minsan, ang napiling konsentrasyon ng buffer ay maaaring ituring na naaangkop. Gayunpaman, sa ilalim ng mga kondisyon ng pagtaas ng temperatura sa kapaligiran o kapag gumagamit ng mas mataas na boltahe, ang pagsingaw ng tubig dahil sa init ay maaaring tumindi, na nagreresulta sa isang labis na mataas na konsentrasyon ng buffer at maging sanhi ng pagkatuyo ng lamad.
Halimbawang Dami
Sa cellulose acetate membrane electrophoresis, ang dami ng sample volume ay tinutukoy ng iba't ibang mga kadahilanan, kabilang ang mga kondisyon ng electrophoresis, mga katangian ng sample mismo, mga paraan ng paglamlam, at mga diskarte sa pagtuklas. Bilang isang pangkalahatang prinsipyo, mas sensitibo ang paraan ng pagtuklas, mas maliit ang dami ng sample, na kapaki-pakinabang para sa paghihiwalay. Kung ang dami ng sample ay sobra-sobra, maaaring hindi malinaw ang mga pattern ng paghihiwalay ng electrophoretic, at maaari ding magtagal ang paglamlam. Gayunpaman, kapag sinusuri nang quantitative ang mga pinaghiwalay na stained band gamit ang elution colorimetric detection method, hindi dapat masyadong maliit ang sample volume, dahil maaari itong magresulta sa mas mababang absorbance value para sa ilang partikular na bahagi, na humahantong sa mas matataas na error sa pagkalkula ng content ng mga ito. Sa ganitong mga kaso, ang dami ng sample ay dapat na naaangkop na tumaas.
Karaniwan, ang dami ng sample na idinagdag sa bawat sentimetro ng linya ng sample na aplikasyon ay mula 0.1 hanggang 5 μL, katumbas ng sample na halaga na 5 hanggang 1000 μg. Halimbawa, sa regular na serum protein electrophoresis analysis, ang sample volume na idinagdag sa bawat sentimetro ng application line sa pangkalahatan ay hindi lalampas sa 1 μL, katumbas ng 60 hanggang 80 μg ng protina. Gayunpaman, kapag pinag-aaralan ang mga lipoprotein o glycoproteins gamit ang parehong paraan ng electrophoresis, kailangang dagdagan ang dami ng sample.
Sa konklusyon, ang pinaka-angkop na dami ng sample ay dapat piliin batay sa mga partikular na kondisyon sa pamamagitan ng isang serye ng mga paunang eksperimento.
Pagpili ng Solusyon sa Paglamlam
Ang mga hiwalay na banda sa cellulose acetate membrane electrophoresis ay karaniwang nabahiran bago matukoy. Ang iba't ibang sample na bahagi ay nangangailangan ng iba't ibang paraan ng paglamlam, at ang mga pamamaraan ng paglamlam na angkop para sa cellulose acetate membrane electrophoresis ay maaaring hindi ganap na naaangkop sa filter na papel.
Mayroong tatlong pangunahing mga prinsipyo upang pumili ng solusyon sa paglamlamcellulose acetate membrane. Una,Ang mga tina na nalulusaw sa tubig ay dapat na mas gusto kaysa sa mga tina na nalulusaw sa alkohol upang maiwasan ang pag-urong ng lamad at pagpapapangit na dulot ng solusyon sa paglamlam ng huli. Pagkatapos ng paglamlam, mahalagang banlawan ang lamad ng tubig at bawasan ang tagal ng paglamlam. Kung hindi, ang lamad ay maaaring kulutin o lumiit, na makakaapekto sa kasunod na pagtuklas.
Pangalawa, mas mainam na pumili ng mga tina na may malakas na pagkakaugnay ng paglamlam para sa sample. Sa cellulose acetate membrane electrophoresis ng mga serum na protina, ang amino black 10B ay karaniwang ginagamit dahil sa malakas na pagkakaugnay ng paglamlam nito para sa iba't ibang bahagi ng serum protein at ang katatagan nito.
Pangatlo, dapat piliin ang maaasahang kalidad na mga tina. Ang ilang mga tina, sa kabila ng pagkakaroon ng parehong pangalan, ay maaaring maglaman ng mga dumi na nagreresulta sa isang partikular na madilim na background pagkatapos ng paglamlam. Maaari pa nitong i-blur ang orihinal na mahusay na pinaghihiwalay na mga banda, na nagpapahirap sa kanila na makilala.
Panghuli, ang pagpili ng konsentrasyon ng solusyon sa paglamlam ay mahalaga. Sa teorya, maaaring mukhang ang isang mas mataas na konsentrasyon ng solusyon sa paglamlam ay hahantong sa mas masusing paglamlam ng mga sample na bahagi at mas mahusay na mga resulta ng paglamlam. Gayunpaman, hindi ito ang kaso. Ang nagbubuklod na pagkakaugnay sa pagitan ng mga sangkap ng sample at ang pangulay ay may isang tiyak na limitasyon, na hindi tumataas sa pagtaas ng konsentrasyon ng solusyon sa paglamlam. Sa kabaligtaran, ang isang labis na mataas na konsentrasyon ng solusyon sa paglamlam ay hindi lamang nag-aaksaya ng pangulay ngunit nagpapahirap din na makamit ang isang malinaw na background. Bukod dito, kapag ang intensity ng kulay ay umabot sa isang tiyak na pinakamataas na halaga, ang absorbance curve ng dye ay hindi sumusunod sa isang linear na relasyon, lalo na sa quantitative measurements. Sa cellulose acetate membrane electrophoresis, ang staining solution concentration ay karaniwang mas mababa kaysa sa ginamit sa paper electrophoresis.
Mga detalyeng dapat malaman tungkol sa Beijing Liuyi Biotechnology's cellulose acetate membraneelectrophoresis tank at ang electrophoresis application nito, mangyaring bisitahin dito:
lEksperimento para sa paghihiwalay ng serum protein sa pamamagitan ng Cellulose Acetate Membrane
lCellulose Acetate Membrane Electrophoresis
Kung mayroon kang anumang plano sa pagbili para sa aming mga produkto, mangyaring huwag mag-atubiling makipag-ugnayan sa amin. Maaari kang magpadala sa amin ng mensahe sa email[email protected]o[email protected], o mangyaring tawagan kami sa +86 15810650221 o idagdag ang Whatsapp +86 15810650221, o Wechat: 15810650221.
Sanggunian:Electrophoresis(Ikalawang edisyon) ni G. Li
Oras ng post: Hun-06-2023