Prinsipyo
Ang cellulose acetate film electrophoresis ay isang paraan ng electrophoresis gamit ang isang cellulose acetate film bilang isang suporta. Ang kababalaghan kung saan ang mga sisingilin na particle ay lumipat patungo sa kabaligtaran na elektrod sa ilalim ng pagkilos ng electric field ay tinatawag na electrophoresis. Dahil ang bawat protina ay may partikular na isoelectric point, kung ang isang protina ay inilagay sa isang solusyon na may pH na mas mababa kaysa sa isoelectric point nito, ang protina ay positibong sisingilin at lilipat patungo sa negatibong elektrod. Sa kabaligtaran, lumilipat ito sa positibong poste. Dahil ang bilis ng paggalaw ng mga molekula ng protina sa isang electric field ay nauugnay sa kanilang singil, ang hugis at sukat ng mga molekula, ang iba't ibang mga protina ay maaaring paghiwalayin ng electrophoresis. Ang serum ay naglalaman ng iba't ibang mga protina, na lahat ay may mga isoelectric point sa pH7.5 o mas mababa. Kapag ang serum ay inilagay sa pH 8.6 buffer upang magpatakbo ng electrophoresis, lahat ng serum na protina ay negatibong sisingilin at lilipat patungo sa positibong bahagi sa electric field. Dahil ang iba't ibang mga serum na protina ay may iba't ibang mga singil sa parehong pH, ang mga molekular na particle ay naiiba sa laki, at sa gayon ang bilis ng paglipat ay naiiba, at sila ay pinaghihiwalay ng electrophoresis. Ang mga isoelectric na puntos at molekular na timbang ng mga serum na protina ay ipinapakita sa talahanayan sa ibaba:
| protina | Isoelectric point(PI) | Molekular na timbang |
| Albumin | 4.88 | 69 000 |
| α1-gloulin | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulin | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulin | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-gloulin | 6.85~7.50 | 156 000~ 300 000 |
Ang eksperimento ay upang paghiwalayin ang iba't ibang mga protina sa serum ng dugo na may cellulose acetate membrane (abbr. CAM) bilang media ng suporta. Ang CAM ay isang uri ng foamed loosepelikula na may magandang uniporme, at ang kapal ay 0.1mm-1.5mm, na may isang tiyak na pagsipsip ng tubig.
Mga materyales, instrumento at reagents para sa CAM Electrophoresis
Mga sample:malusog na serum ng dugo ng tao
Instrumento:power supply DYY-6C, electrophoresis tank DYCP-38C, superyor na sample loading WD-9404
Ang mga reagents
1) cellulose acetate membrane 7X9cm
2) PH 8.6 barbitol buffer solution (ionic strength 0.05-0.09, ito ay 0.06tid time.): kumuha ng 1,84g Diethyl barbituric acid, at pagkatapos ay kumuha ng 1.03g Diethyl sodium pentobarbital, magdagdag ng ilang distilled water para init para matunaw, at gawin hanggang sa 1000ml;
3) Mantsa: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, magdagdag ng 100ml distilled water;
4) TBS/T o PBS/T: 45ml 95% ethanol, 5ml glacial acetic acid, magdagdag ng 50ml distilled water;
5) Solusyon sa Paglilinis: 70ml anhydrous ethanol, 30ml glacial acetic acid.
Eksperimento sa Paraand
1) Ihanda ang lamad: Ilubog ang lamad sa barbitol buffer solution 30min-8h, at ilabas ito, alisin ang sobrang solusyon sa pamamagitan ng sumisipsip na papel.
2) Naglo-load ng mga sample: Kilalanin ang magaspang na bahagi at makinis na bahagi ng lamad, at markahan ang isang linya sa 1.5cm na distansya sa tuktok na dulo sa magaspang na bahagi. Mag-load ng mga sample sa pamamagitan ng superior sample loading tool sa magaspang na bahagi. Tandaan: Ang mga sample ay dapat na maikarga sa magaspang na bahagi ng lamad. Matapos ang mga sample ng serum ay ganap na natagos sa lamad, baligtarin ang lamad, ilagay ang magaspang na bahagi (na may mga sample) na nakaharap sa tangke, at ang dulo na may mga sample ay inilalagay sa negatibong elektrod.
3) Electrophoresis: I-on ang power supply, 0.4～0.6m A/cm lamad, ang oras ng pagtakbo ay 30-45 min. Pagkatapos magpatakbo ng electrophoresis, patayin ang kapangyarihan.
4) Mantsa at malinis: Alisin ang lamad mula sa tangke, at isawsawit sa solusyon ng pangulay sa loob ng 5 min, at pagkatapos ay linisin ito sa solusyon sa paglilinis nang paulit-ulit nang 3-4 na beses hanggang sa maging malinaw ang kulay ng background. Ang mga serum na protina ay dapat ipakita sa mga banda, at karaniwang mayroong limang mga zone, na bumubuo sa tuktok na dulo sa minarkahang linya, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Pagpapanatili: ilagay ang tuyong electrophoresisbandasa solusyon sa paglilinis para sa 10-15 minuto, at pagkatapos ay ilabas ito at ilagay ito sa isang malinis na baso, pagkatapos na matuyo, ito ay magiging isang transparent na pelikulabanda.
EksperimentoResulta
Ang epekto ng paghihiwalay ng mga sample ng serum ay mabuti, at walang band tailing phenomenon. Ang repeatability ng mga resulta ay nag-iiba-iba dahil sa mga pamamaraan ng pagsubok at mga pamamaraan ng experimenter, at ang repeatability ay mataas.
Konklusyon
Ang mabilis na clinical electrophoresis detection system (Tangke ng electrophoresisDYCP-38C,suplay ng kuryenteDYY-6C at superior sample loading WD-9404) na ginawa ng amingkumpanya Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdnakakatugon sa mga pang-eksperimentong kinakailangan,atang mga resulta ay maaaring kopyahin, simple at mabilis, angkop para sapagtuturopananaliksik.
Beijing LiuyiAng Biotechnology Co., Ltd ay dalubhasa sa pagmamanupaktura ng mga produktong electrtophoresis para sa industriya ng agham ng buhay, naay may higit sa 50-taong kasaysayan sa China at ang kumpanya ay maaaring magbigay ng matatag at mataas na kalidad na mga produkto sa buong mundo. Sa pamamagitan ng mga taon ng pag-unlad, ito ay karapat-dapat sa iyong pinili!
Naghahanap kami ngayon ng mga kasosyo, parehong OEM electrophoresis tank at mga distributor ay tinatanggap.
Para sa karagdagang impormasyon tungkol sa amin, mangyaring makipag-ugnayan sa amin sa pamamagitan ng email[email protected]o[email protected].
Oras ng post: Nob-14-2022