Comet Assay: Isang Sensitibong Teknik para sa Pag-detect ng Pinsala at Pag-aayos ng DNA

Ang Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) ay isang sensitibo at mabilis na pamamaraan na pangunahing ginagamit upang makita ang pinsala at pagkumpuni ng DNA sa mga indibidwal na selula. Ang pangalang "Comet Assay" ay nagmula sa katangiang hugis tulad ng kometa na lumilitaw sa mga resulta: ang nucleus ng cell ay bumubuo ng "ulo," habang ang mga nasirang fragment ng DNA ay lumilipat, na lumilikha ng isang "buntot" na kahawig ng isang kometa.

Prinsipyo

Ang prinsipyo ng Comet Assay ay batay sa paglipat ng mga fragment ng DNA sa isang electric field. Ang buo na DNA ay nananatili sa loob ng cell nucleus, habang ang nasira o pira-pirasong DNA ay lumilipat patungo sa anode, na bumubuo ng "buntot" ng kometa. Ang haba at intensity ng buntot ay direktang proporsyonal sa lawak ng pinsala sa DNA.

Pamamaraan

1. Paghahanda ng Cell: Ang mga cell na susuriin ay hinaluan ng low-melting-point agarose at kumakalat sa mga slide ng mikroskopyo upang bumuo ng isang pare-parehong layer.
2. Cell Lysis: Ang mga slide ay inilulubog sa isang lysis solution upang alisin ang cell membrane at nuclear membrane, na inilalantad ang DNA.
3. Electrophoresis: Ang mga slide ay inilalagay sa isang electrophoresis chamber sa ilalim ng alkaline o neutral na mga kondisyon. Ang mga nasirang fragment ng DNA ay lumilipat patungo sa positibong elektrod sa ilalim ng impluwensya ng electric field.
4. Pagmantsa: Pagkatapos ng electrophoresis, ang mga slide ay nabahiran ng fluorescent dye (hal., ethidium bromide) upang mailarawan ang DNA.
5. Pagsusuri ng mikroskopiko: Gamit ang fluorescence microscope o espesyal na software, sinusuri ang mga hugis ng kometa, at sinusukat ang mga parameter gaya ng haba at intensity ng buntot.

Larawan mula sa biorender

Pagsusuri ng Datos

Ang mga resulta mula sa Comet Assay ay sinusuri batay sa ilang pangunahing parameter:

• Haba ng buntot: Kinakatawan ang distansya ng paglilipat ng DNA, na nagpapahiwatig ng lawak ng pinsala sa DNA.
• Nilalaman ng DNA sa buntot: Ang porsyento ng DNA na lumilipat sa buntot, kadalasang ginagamit bilang isang sukatan ng dami ng pinsala sa DNA.
• Olive Tail Moment (OTM): Pinagsasama ang parehong haba ng buntot at nilalaman ng DNA ng buntot upang magbigay ng mas komprehensibong sukatan ng pinsala sa DNA.

Mga aplikasyon

1. Pag-aaral ng Genotoxicity: Ang Comet Assay ay malawakang ginagamit upang masuri ang mga epekto ng mga kemikal, gamot, at radiation sa cell DNA, na ginagawa itong pangunahing tool para sa genotoxicity testing.
2. Toxicology sa kapaligiran: Nakakatulong ito sa pagsusuri sa epekto ng mga pollutant sa kapaligiran sa DNA ng mga organismo, na nagbibigay ng mga insight sa kaligtasan ng ecosystem.
3. Medikal at Klinikal na Pananaliksik: Ang Comet Assay ay ginagamit sa pag-aaral ng mga mekanismo ng pag-aayos ng DNA, kanser, at iba pang mga sakit na nauugnay sa DNA. Sinusuri din nito ang epekto ng mga therapy sa kanser tulad ng radiotherapy at chemotherapy sa DNA.
4. Mga Agham sa Pagkain at Agrikultura: Ginagamit upang masuri ang kaligtasan ng mga pestisidyo, mga additives sa pagkain, at iba pang mga sangkap, at upang pag-aralan ang mga nakakalason na epekto nito sa mga modelo ng hayop.

Mga kalamangan

• Mataas na Sensitivity: May kakayahang makita ang mababang antas ng pinsala sa DNA.
• Simpleng Operasyon: Ang pamamaraan ay diretso, ginagawa itong angkop para sa high-throughput na screening.
• Malawak na Aplikasyon: Maaari itong ilapat sa iba't ibang uri ng cell, kabilang ang mga selula ng hayop at halaman.
• Mga Hamon sa Quantification: Habang nagbibigay ng qualitative data sa DNA damage, ang quantitative analysis ay lubos na umaasa sa software at image analysis techniques.
• Eksperimental na Kondisyon: Ang mga resulta ay maaaring maimpluwensyahan ng mga salik tulad ng electrophoresis time at pH, na nangangailangan ng maingat na kontrol sa mga pang-eksperimentong kundisyon.

Mga Limitasyon

Ang Comet Assay ay isang napakahalagang tool sa biomedical research, environmental science, at drug development dahil sa flexibility at mataas na sensitivity nito sa pag-detect ng pinsala at pagkumpuni ng DNA. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)nag-aalok ng horizontal electrophoresis chamber para sa comet assay. Maligayang pagdating sa pakikipag-ugnayan sa amin upang pag-usapan ang tungkol saPagsusuri ng Kometaprotocol.

Ang Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ay dalubhasa sa pagmamanupaktura ng mga instrumento ng electrophoresis sa loob ng higit sa 50 taon gamit ang aming sariling propesyonal na teknikal na koponan at R&D center. Mayroon kaming maaasahan at kumpletong linya ng produksyon mula sa disenyo hanggang sa inspeksyon, at bodega, pati na rin ang suporta sa marketing. Ang aming mga pangunahing produkto ay Electrophoresis Cell (tangke/chamber), Electrophoresis Power Supply, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System atbp. Nagbibigay din kami ng mga instrumento sa lab tulad ng PCR instrument, vortex mixer at centrifuge para sa laboratoryo.

Kung mayroon kang anumang plano sa pagbili para sa aming mga produkto, mangyaring huwag mag-atubiling makipag-ugnayan sa amin. Maaari kang magpadala sa amin ng mensahe sa email[email protected]o[email protected], o mangyaring tawagan kami sa +86 15810650221 o idagdag ang Whatsapp +86 15810650221, o Wechat: 15810650221.

Mangyaring I-scan ang QR code upang idagdag sa Whatsapp o WeChat.