Paghahanda ng Sampol atNaglo-load
Dahil sa paggamit ng tuluy-tuloy na buffer system na walang stacking gel sa karamihan ng mga kaso, ang mga sample ay dapat magkaroon ng angkop na konsentrasyon at maliit na volume. Gumamit ng apipetteupang dahan-dahang idagdag ang sample, na may 5-10 μg bawat balon, upang maiwasan ang isang makabuluhang pagbaba sa resolution. kailannaglo-load ng sample, dapat patayin ang power supply. Ang sample ay dapat maglaman ng indicator dye (0.025% bromophenol blue o orange) at sucrose (10-15%) o glycerol (5-10%) upang mapataas ang density nito, ma-concentrate ang sample, at maiwasan ang diffusion. Gayunpaman, kung minsan ang sucrose o glycerol ay maaaring maging sanhi ng mga hugis-U na banda sa mga resulta ng electrophoresis, na maiiwasan sa pamamagitan ng paggamit ng 2.5% Ficoll (polyvinylpyrrolidone).
Electrophoresis
Ang boltahe para sa electrophoresis ay 5-15 V/cm, sa pangkalahatan ay nasa 10 V/cm. Para sa paghihiwalay ng malalaking molekula, ang boltahe ay dapat na mas mababa, karaniwang hindi hihigit sa 5 V/cm.
Pagmantsa
Ang fluorescent dye ethidium bromide (EB) ay karaniwang ginagamit para sa paglamlam upang obserbahan ang mga banda ng DNA sa agarose gel. Maaaring magpasok ang EB sa pagitan ng mga pares ng base ng mga molekula ng DNA, na nagiging sanhi ng pagbubuklod ng EB sa DNA. Ang pagsipsip ng 260 nm ultraviolet light ng DNA ay inilipat sa EB, at ang nakatali na EB ay naglalabas ng fluorescence sa 590 nm sa red-orange na rehiyon ng nakikitang light spectrum. Ang paglamlam sa gel sa isang 1 mmol/L MgSO4 na solusyon sa loob ng 1 oras ay maaaring mabawasan ang background fluorescence na dulot ng hindi nakatali na EB, na nagpapadali sa pagtuklas ng maliliit na halaga ng DNA.
Ang EB dye ay may ilang mga pakinabang: madali itong gamitin, hindi nakakasira ng mga nucleic acid, may mataas na sensitivity, at maaaring mantsang pareho ang DNA at RNA. Maaaring idagdag ang EB sa sample at masubaybayan gamit ang UV absorption anumang oras. Pagkatapos ng paglamlam, ang EB ay maaaring alisin sa pamamagitan ng pagkuha ng n-butanol.
Gayunpaman, ang EB dye ay isang makapangyarihang mutagen, at ang mga pag-iingat, tulad ng pagsusuot ng polyethylene gloves, ay dapat gawin habang hinahawakan. Ang acridine orange ay isa ring karaniwang ginagamit na pangulay dahil maaari itong magkaiba sa pagitan ng single-stranded at double-stranded nucleic acids (DNA, RNA). Nagpapakita ito ng berdeng fluorescence (530 nm) para sa double-stranded nucleic acid at red fluorescence (640 nm) para sa single-stranded nucleic acid. Bukod pa rito, maaaring gamitin ang iba pang mga tina gaya ng methylene blue, methylene green, at quinoline B para sa paglamlam.
Ang Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ay dalubhasa sa pagmamanupaktura ng mga instrumento ng electrophoresis sa loob ng higit sa 50 taon gamit ang aming sariling propesyonal na teknikal na koponan at R&D center. Mayroon kaming maaasahan at kumpletong linya ng produksyon mula sa disenyo hanggang sa inspeksyon, at bodega, pati na rin ang suporta sa marketing. Ang aming mga pangunahing produkto ay Electrophoresis Cell (tangke/silid), Electrophoresis Power Supply, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System atbp.
Naghahanap kami ngayon ng mga kasosyo, parehong OEM electrophoresis tank at mga distributor ay tinatanggap.
Kung mayroon kang anumang plano sa pagbili para sa aming mga produkto, mangyaring huwag mag-atubiling makipag-ugnayan sa amin. Maaari kang magpadala sa amin ng mensahe sa email[email protected]o[email protected], o mangyaring tawagan kami sa +86 15810650221 o idagdag ang Whatsapp +86 15810650221, o Wechat: 15810650221.
Mangyaring I-scan ang QR code upang idagdag sa Whatsapp o WeChat.
Oras ng post: Dis-20-2023