1. Pag-uuri
Ang gel electrophoresis ay nahahati sa mga vertical na uri (kabilang ang column gels at slab gels) at pahalang na uri (pangunahin ang slab gels) (Figure 6-18). Sa pangkalahatan, ang vertical na paghihiwalay ay bahagyang nakahihigit sa pahalang, ngunit ang pahalang na paghahanda ng gel ay may hindi bababa sa apat na pakinabang: mayroong suporta sa ilalim ng buong gel, na nagpapahintulot sa paggamit ng mababang-konsentrasyon na agarose; posible na maghanda ng agarose gel plates ng iba't ibang mga pagtutukoy; Ang paghahanda ng gel at pag-load ng sample ay mas maginhawa; ang electrophoresis chamber ay madaling itayo at cost-effective. Dahil ang pahalang na electrophoresis ay ginagawa gamit ang agarose gel plate na ganap na nakalubog mga 1mm sa ibaba ng ibabaw ng electrophoresis buffer, ito ay tinatawag ding submerged electrophoresis.
Electrophoresis Tank DYCP-31DN para sa agarose gel electrophoresis
2.Buffer System
Sa paghihiwalay ng nucleic acid, karamihan sa mga sistema ay gumagamit ng tuluy-tuloy na mga sistema. Kasama sa mga karaniwang ginagamit na electrophoresis buffer ang TBE (0.08mol/L Tris·HCl, pH 8.5, 0.08mol/L boric acid, 0.0024mol/L EDTA) buffer at THE (0.04mol/L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol/L sodium acetate, 0.0018mol/L EDTA) buffer. Ang mga buffer na ito ay karaniwang inihahanda bilang 10x stock solution at diluted sa kinakailangang konsentrasyon kapag ginagamit. Ang mga rate ng paglipat ng linear at pabilog na DNA sa agarose gel ay nag-iiba sa ginamit na buffer. Sa THE buffer, ang migration rate ng linear DNA ay mas malaki kaysa sa circular DNA, habang sa TBE buffer, ang kabaligtaran ay totoo.
3.Paghahanda ng Agarose Gel
(1) Paghahanda ng Horizontal Agarose Gel
(a) Ihanda ang kinakailangang konsentrasyon ng agarose gel gamit ang 1x electrophoresis buffer.
(b) Painitin ang agarose upang makumpleto ang pagkatunaw alinman sa isang paliguan ng tubig na kumukulo, sa isang magnetic stirrer, o sa isang microwave. Palamigin ang agarose solution sa 55°C at idagdag ang ethidium bromide (EB) dye sa panghuling konsentrasyon na 0.5 μg/ml.
(c) I-seal ang mga gilid ng salamin o acrylic plate na may kaunting agarose gel, magdagdag ng suklay, at iposisyon ang mga ngipin ng suklay mga 0.5~1.0 mm sa itaas ng plato.
(d) Ibuhos ang natunaw na agarose gel solution nang tuluy-tuloy sa molde na salamin o acrylic plate (ang kapal ay depende sa dami ng sample ng DNA), pag-iwas sa pagpasok ng mga bula ng hangin. Hayaang tumigas ito nang natural sa temperatura ng silid.
(e) Maingat na alisin ang suklay pagkatapos ng kumpletong solidification. Magdagdag ng naaangkop na dami ng electrophoresis buffer sa gel tank, na tinitiyak na ang gel plate ay nakalubog mga 1 mm sa ibaba ng ibabaw ng electrophoresis buffer.
(2) Paghahanda ng Vertical Agarose Gel
(a) Alisin ang grasa o nalalabi sa mga glass plate sa pamamagitan ng paghuhugas ng ethanol.
(b) Ilagay ang mga spacer plate sa pagitan ng harap at likod na mga dam, ihanay ang mga gilid ng mga spacer plate sa harap at likod na mga dam, at i-secure ang mga ito gamit ang mga clamp.
(c) Magdagdag ng 2% agarose sa 1x buffer sa pagitan ng mga gilid ng spacer plates upang bumuo ng 1 cm mataas na agarose plug sa ilalim ng gel casting chamber.
(d) Ibuhos ang natunaw na agarose gel sa nais na konsentrasyon, na inihanda sa 1x buffer, sa silid ng gel hanggang sa 1 cm sa ibaba ng tuktok.
(e) Ipasok ang suklay, iwasang ma-trap ang mga bula ng hangin sa ilalim ng mga ngipin ng suklay. Minsan, ang mga wrinkles ay maaaring lumitaw sa suklay na ngipin sa panahon ng paglamig ng agarose gel; sa ganitong mga kaso, magdagdag lamang ng ilang tinunaw na agarose sa itaas upang patigasin ito.
(f) Alisin ang suklay. Upang maiwasan ang pagtagas ng buffer sa loading slot, i-seal ang koneksyon sa pagitan ng agarose gel plate at ng electrophoresis chamber na may 2% agarose at idagdag ang kinakailangang halaga ng buffer.
(g) Magdagdag ng 1x electrophoresis buffer sa gel chamber.
(h) Maingat na i-load ang mga sample ng DNA sa agarose gel sa ilalim ng buffer.
Higit pang impormasyon tungkol sa pangunahing kaalaman tungkol sa agarose gel electrophoresis, ibabahagi namin sa susunod na linggo. Nais na maging kapaki-pakinabang ang impormasyong ito sa iyong eksperimento.
Ang Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ay dalubhasa sa pagmamanupaktura ng mga instrumento ng electrophoresis sa loob ng higit sa 50 taon gamit ang aming sariling propesyonal na teknikal na koponan at R&D center. Mayroon kaming maaasahan at kumpletong linya ng produksyon mula sa disenyo hanggang sa inspeksyon, at bodega, pati na rin ang suporta sa marketing. Ang aming mga pangunahing produkto ay Electrophoresis Cell (tangke/silid), Electrophoresis Power Supply, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System atbp.
Naghahanap kami ngayon ng mga kasosyo, parehong OEM electrophoresis tank at mga distributor ay tinatanggap.
Kung mayroon kang anumang plano sa pagbili para sa aming mga produkto, mangyaring huwag mag-atubiling makipag-ugnayan sa amin. Maaari kang magpadala sa amin ng mensahe sa email[email protected]o[email protected], o mangyaring tawagan kami sa +86 15810650221 o idagdag ang Whatsapp +86 15810650221, o Wechat: 15810650221.
Mangyaring I-scan ang QR code upang idagdag sa Whatsapp o WeChat.
Oras ng post: Dis-07-2023